Isolamento de Bactérias e Obtenção de Cultura Pura

Os materiais e métodos utilizados no processo de isolamento e obtenção de cultura pura são:

– Caixas de Petri com Agar nutriente e colônias em desenvolvimento;

– Tubos de caldo nutriente com crescimento;

– Ansas de inoculação;

– Caixas de Petri com Agar nutriente estéril;

– Lamparinas de álcool ou bicos de Bunsen.

Após a obtenção das colônias de microorganismos, deve-se efetuar a anotação das características morfológicas da(s) colônia(s) selecionada(s), tais como: forma, tamanho, cor, elevação e bordas.

Em seguida deve-se observar se ocorreu a formação de sedimentos, turvação homogênea e/ou película superficial.

Com uma ansa previamente esterilizada à chama e arrefecida, toque numa das colônias escolhidas e semeie em placa de Agar nutriente, seguindo os movimentos exemplificados na Figura. Esterilize a ansa antes de cada arrastamento.

Deve-se anotar na placa de Petri, de onde provem o inoculo e a data para cada tipo de colônia selecionada. Após a semeadura, inverter as caixas e incubá-las a 30-370C, por 48 horas.

Para o sucesso do experimento é importante observar as condições de assepsia, ter cuidado na seleção das colônias e tocar com a ansa apenas numa colônia. Os movimentos da ansa em cima do caldo nutriente devem ser cautelosos de modo o se obter um bom isolamento das novas colônias. Somente abra a tampa das caixas quando necessário, p.ex, para as inoculações. Trabalhe sempre junto á chama da sua lamparina ou bico de Bunsen.

Após a obtenção da cultura pura, efetuar um esfregaço e corá-lo com a metodologia da coloração de Gram. Posteriormente proceder o teste da Catalase.

– Coloque uma gota de peróxido de hidrogênio a 3% numa lamina de vidro limpa;

– Retire um pouco da sua colônia com uma pipeta Pauster previamente esterilizada à chama;

– Verifique se libertam bolhinhas (reação positiva) ou não (reação negativa).