Microscópio de Luz

O crédito da invenção do microscópio é discutível, mas sabe-se que em 1590 os irmãos holandeses Franz, Johan e Zacarias Jensen compuseram um artefato rudimentar munido de um sistema de lentes, que permitia a ampliação e a observação de pequenas estruturas e objetos com razoável nitidez.

Princípio:

O microscópio de luz utiliza como fonte de iluminação a luz branca comum para permitir a observação de materiais. Esse instrumento fornece uma imagem consideravelmente aumentada, geralmente invertida verticalmente (de cima para baixo) e invertida horizontalmente (da esquerda para a direita). O aparelho é constituído basicamente por uma parte mecânica que serve de suporte, e uma parte óptica, constituída por três sistemas de lentes: o condensador, as objetivas e as oculares.

▓ condensador: é o conjunto de lentes que regula a luz, assim concentrando e fornecendo luminosidade necessária à iluminação do objeto em estudo. Sempre a abertura numérica do condensador deve ser ajustada para a objetiva que está sendo utilizada, para que se obtenha uma melhor qualidade da imagem a ser fotografada.

▓ objetivas: projeta a imagem do objeto de forma aumentada e em direção à ocular, o que permite a visibilização de tal objeto.

▓ oculares: são formadas por um sistema de lentes que amplia a imagem recebida através das objetivas e projeta para a retina.

A qualidade de uma imagem depende da capacidade da lente de aumentar o objeto e da resolução. O poder de resolução é a capacidade que o microscópio possui de distinguir dois pontos adjacentes. Na prática, o poder de resolução é a menor distância que pode existir entre dois pontos para que apareçam individualizados. Assim, quanto menor for o limite de resolução da objetiva, maior será o respectivo poder de resolução.

O limite de resolução (LR) do microscópio de luz depende do comprimento de onda (λ) da radiação utilizada e da abertura numérica (a.n.) da objetiva, dado pela seguinte equação:

L.R. = λ.K / a.n.

Donde:

K = constante (0,61)

λ = comprimento de onda da luz (na faixa do verde – amarelo)

a.n. = A abertura numérica é a medida da capacidade de uma lente para receber informação (luz) de um objecto e é definida pela equação: a.n. = n . sen θ, onde n é o índice de refração do meio entre o objeto e a objetiva (n=1 para o ar, n=1,33 para a água e n=1,5 para o vidro e para o óleo de imersão), e onde θ é o semi-ângulo de abertura, formado pelo eixo óptico e os raios externos do feixe de luz que penetram na objetiva.

Aplicação:

O microscópio de luz permite aumentar o tamanho de tecidos em até 2.000X.

Quando for focar o objeto comece pela lente de menor aumento, isso facilita muito o manuseio.

A partir da objetiva de 40X deve ser utilizado uma interface líquida entre a objetiva e o material na lâmina. Essa interface líquida deve ter o mesmo índice de refração da objetiva. 100X deve ser utilizado o óleo de imersão para que o índice de refração seja igual para a lâmina de vidro e o óleo. Isto faz com que os raios luminosos não se dispersem ao atravessarem o conjunto lâmina-óleo, permitindo a entrada de um grande cone de luz na objetiva. E assim permite uma melhor resolução. Algumas pessoas utilizam água ao invés de óleo de imersão, principalmente em objetivas acima de 40X.

Iluminação crítica ou Köhler:

A iluminação Köhler é necessária para que se tenha a quantidade de luz ideal para fotografar o objeto de estudo, é obtida quando o condensador focaliza a luz no objeto e a luz transmitida no objeto para a objetiva quase que preenche completamente as lentes.

Em cada objetiva há inscrições sobre a quantidade de luz requerida e essa quantidade de deve ser ajustada no condensador a cada vez que trocar de objetiva.

Cuidados para uma maior durabilidade do seu microscópio:

-O microscópio deve estar sempre com uma capa para evitar acúmulo de pó. Essa capa deve ter microporos para inviabilizar a multiplicação de fungos. Manter a capa limpa.

-As objetivas devem ser limpas com papel filtro macio para que não risque a lente, embebido numa mistura de 70% etanol + 30% de éter, não inundar a lente!!!. Usar apenas éter para limpar o óleo de imersão, o álcool criará um aspecto fosco na lente. Se necessário usar benzina absoluta para limpar as lentes após o uso do óleo de imersão.

Microscópio de luz e eletrônico

Para a realização de estudos e análise de estruturas de pequeno tamanho é necessário a utilização do microscópio de luz, pois com esse instrumento é possível aumentar a visualização em até 1500 vezes, embora o aumento seja significativo não se pode alcançar grandes detalhes da estrutura celular.

O estereoscópio é popularmente chamado de lupa. Comumente é indicado para a realização de observação e análise de estruturas e organismos de tamanho mais elevado.

O microscópio biológico binocular realiza uma melhor visualização de uma estrutura, no entanto, os elementos possivelmente estudados devem ser indiferentes a passagem de luz.

O crescimento da imagem do objeto que visualizamos é proveniente do microscópio formado pela multiplicação do aumento ocular por meio do crescimento da objetiva.

Com o invento do microscópio eletrônico tornou possível a realização de análises e estudos com maior riqueza de detalhes das estruturas celulares, fazendo elevados aumentos dos objetos a serem estudados, o funcionamento do microscópio é diferente dos de luz, pois utiliza feixes de elétrons.

O microscópio eletrônico possui dois tipos de transmissão e de varredura, a diferença entre os dois é que o de transmissão serve para estudar as estruturas cortadas em fatias muito finas, em contrapartida, os microscópios de varredura são utilizados para analisar a superfície do corpo de seres vivos, de células e de moléculas.

Para a realização do trabalho utilizando o microscópio eletrônico é preciso que o material esteja fixo e corado com sais de metais pesados para favorecer os contrastes em todas as estruturas das células, os corantes fazem com que as estruturas fiquem menos permeáveis aos feixes de elétrons, no qual as estruturas mais coradas são visualizadas em preto e branco ou ainda cinza-escuro e as que são menos coradas em cinza-claro.

A imagem é visualizada em uma tela e também há possibilidade de ser expressa em forma de fotografia, essas por serem preto e branco podem ser coloridas através de equipamentos especiais, as fotos são denominadas de micrografias.